非结构蛋白NS1-ELISA检测禽流感野毒感染抗体

• 作者: 刘守川 李建丽 王泽霖 陈少渠
• 来源期刊: 科技导报
• 学科: 农学
• 关键词: AIV,H5N2亚型 RT-PCR NS1基因 表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 禽流感研究专题
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 字数: 5474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-7857.2006.03.004

摘要

利用RT-PCR技术扩增获得了H5N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为678 bp.成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1 mmol/I的IPTG诱导表达5 h,经15%的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28 KD的NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在.NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化或用尿素变性复性,获得纯度较高的NS1蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法.最佳包被浓度为2.5 μ g/ml,血清的最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗的最佳工作稀释度为1:5000.重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,而不与ND、IB、IBD、EDS76的阳性血清反应.分别检测H9N2、H5N2和H5N1亚型灭活疫苗和H9N2纯化病毒免疫的血清,各5份,其平均OD490值分别为0.225、0.210、0.205和0.184,均为阴性;而对HgN2和H5N2亚型活毒感染10～15 d的血清进行检测,各5份,其平均OD490值分别为0.610和0.619,均为阳性.因此,NS1蛋白能特异地区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群,可作为一种鉴别诊断标记,但不能区分亚型,具有A型特异性.NS1-ELISA方法的初步应用,不仅为生产提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法,为进一步组装成试剂盒奠定了基础,也为禽流感的早期诊断、适时监控和净化提供了行之有效的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王泽霖	河南农业大学禽病研究所	53	377	11.0	16.0
2	陈少渠	河南农业大学禽病研究所	10	70	4.0	8.0
3	刘守川	河南农业大学禽病研究所	6	58	4.0	6.0
4	李建丽	河南农业大学禽病研究所	11	115	5.0	10.0