应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法

• 作者: 李媛 王砚范 辛九庆 钱爱东 高玉龙
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 牛传染性胸膜肺炎 脂蛋白LppQ 突变 ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 181-186
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 5519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.01.026

摘要

[目的]丝状支原体丝状亚种SC(Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagious bovine pleuropneumonia,CBPP)的病原体.成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间长,抗体滴度高,因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原.[方法]由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸(Trp),而在细菌中则为终止密码子,故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRI X的1ppQ基因进行原核表达,利用重组抗原建立间接ELISA方法.[结果]序列分析表明,将1ppQ基因第198位的A成功突变为G,并将突变后的脂蛋白LppQ N端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,构建了原核表达载体.重组菌经诱导后,表达出了分子量约为42kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白,纯化后蛋白质纯度高达95%,Westernblot结果显示,重组蛋白具有很好的免疫活性.将纯化的蛋白质稀释至0.35 μg·ml-1,包被酶标反应板,优化反应条件,P/N为4.8(0.934/0.193).应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376,敏感性为95.8%(46/48),特异性为98.9%(161/163).应用间接ELISA和补体结合试验(CFT)对来自3个省自治区3 817头份牛血清进行了检测.[结论]Kappa值为0.63,两种方法存在中、高度一致性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱爱东	吉林农业大学动物科技学院	283	1216	15.0	21.0