hIAP-2 siRNA表达质粒的构建及其对乳腺癌细胞MCF-7的作用

• 作者: 李莉萍 梁念慈 罗超权
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人凋亡抑制蛋白2 siRNA 乳腺肿瘤 细胞裂亡
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 150-155
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9
• 字数: 5450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.02.010

摘要

目的:构建人凋亡抑制蛋白2(hIAP-2)基因的小分子干扰RNA(siRNA)的表达质粒,并检测其对乳腺癌细胞MCF-7的作用.方法:利用含U6启动子的mU6pro载体构建hIAP-2 siRNA表达质粒,RT-PCR和Western印迹法检验其对MCF-7细胞的RNA干扰(RNAi)效果.用MTT法分析其对细胞增殖,流式细胞仪检测其对细胞周期,以及Hoechst染色法观察其对细胞形态的影响.同时,用胱天蛋白酶-3(caspase-3) Ac-DEVD-pNA底物法检测caspase-3活性的变化,Western印迹法检测一些相关蛋白质的表达变化.结果:hIAP-2 siRNA表达质粒高效而特异地剔降MCF-7细胞中hIAP-2的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断MCF-7细胞在G1期.随着hIAP-2基因被沉默,MCF-7细胞变得多核化和巨核化,caspase-3酶原表达升高并被激活(P<0.01).此外,IκBα和p21waf1蛋白表达升高,NF-κB(p65)则降低,Cyt C维持不变.结论:RNA干扰hIAP-2对MCF-7细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞裂亡可能是导致其细胞死亡的主要原因,DNA受损后其细胞周期阻滞在G1期可能与上调p21waf1有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李莉萍	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	10	23	3.0	4.0
2	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
3	罗超权	中山大学医学部生物化学教研室	20	115	5.0	10.0