抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定

• 作者: 伍艳芳 刘进军 唐捷 易维京 李鹏 胡川闽 郭建秀 郭鹰
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞移动抑制因子 原核表达 单克隆抗体 制备
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 546-549
• 页数: 4页
• 分类号: R329-33|R392.11|R392.2
• 字数: 4115字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.06.016

摘要

目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(human macrophage migrationinhibitoryfactor,hMIF)原核表达系统并制备其单克隆抗体.方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hMIF cDNA,测序后构建pET11b/hMIF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hMIF;重组hMIF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性.结果构建pET11b/hMIF重组表达质粒,表达出预期hMIF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%.Western blotting鉴定为hMIF,NO释放实验证实具有生物学活性.两种免疫方案共获得9株分泌抗hMIF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经Western blotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性.结论获得hMIF重组蛋白和抗hMIF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础.