目的:建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术.方法:分离200g雄性SD大鼠心肌线粒体,抽提心肌线粒体的全蛋白,以固相pH梯度、等电聚焦为第一向和垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向行双向凝胶电泳,对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式等相关技术进行优化.凝胶行硝酸银染色,扫描仪获取凝胶图像并用PDQuest软件进行分析.结果:45%乙醇和5%乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好;构建了心肌线粒体高分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱.结论:建立了SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的双向凝胶电泳分析技术.