柯萨奇病毒B4双siRNA表达载体的构建及表达

• 作者: 史红艳 徐德启 李凡
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 柯萨奇病毒B4 siRNA 遗传载体
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 207-209,223
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2006.02.009

摘要

目的:构建以柯萨奇病毒B4的1A和2A基因为靶基因并带有绿色荧光蛋白标志的可表达发夹结构的双链siRNA的表达载体pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A/2A.方法:选择柯萨奇病毒B4的1A和2A区基因21 bp为靶序列分别合成65 bp的互补片段并克隆到pSilencer2.1U6 Neo和pGCsi-U6/Neo/GFP质粒中,经限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳分离、回收DNA片段,及连接酶连接构建双siRNA表达质粒pU6/doublesiRNA/Neo/GFP/1A/2A;将构建的载体转染Hela细胞后,荧光显微镜观察荧光的表达.结果:限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A/2A,有正确的特异性片段,DNA测序也证明其具有正确序列;将该重组质粒转染入Hela细胞后,重组质粒构建成功并在真核细胞内表达GFP,表达时间可达15 d以上.结论:针对柯萨奇病毒B4的1A和2A基因的双siRNA表达载体pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A/2A构建成功,并可在真核细胞内持续表达15 d以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凡	吉林大学基础医学院病原生物学教研室	134	746	13.0	21.0
2	史红艳	吉林大学基础医学院病原生物学教研室	35	116	5.0	9.0