改良人源杀菌肽LL-37的两种构建及表达方法的对比研究

• 作者: 刘友生 杨艳丽 葛晓冬 邹佳
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: LL-37 蛋白质融合表达 承载蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2020-2023
• 页数: 4页
• 分类号: Q516|Q591.2
• 字数: 4125字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.20.002

摘要

目的 将改良人源杀菌肽LL-37(rLL-37)用两种方法构建,并分别在原核细胞中融合表达,以寻找较好的制备方法.方法 ①将编码rLL-37基因序列放入载体pET-28a(+),构建表达质粒pET-28a(+)-rLL-37,并于工程菌 BL21(DE3)中融合表达、纯化;②将编码rLL-37基因序列中的部分原核细菌稀有密码子替换为原核细菌偏爱密码子,并在其N端加入一段编码带负电荷的承载蛋白(carrier protein molecule, CPM)基因序列,构建表达质粒pET-30a(+)-CPM-rLL-37,并于工程菌 BL21 Star(DE3)中融合表达、纯化.对比上述2种方法rLL-37的制备率,并初步研究其抗菌性.结果 通过Touch-Down PCR法成功获得rLL-37多肽的DNA序列,质粒pET-28a(+)-rLL-37于杆菌BL21(DE3)中表达,融合蛋白约占全菌蛋白的20%,并成功由强阳离子交换柱芯Macro-Prep High S纯化;设计了一段含28个氨基酸残基的CPM (pHi 2.7、pH 7.4时电荷为-6.0),成功构建表达质粒pET-30a(+)-CPM-rLL-37,并于杆菌BL21 star(DE3)中表达,融合蛋白约占全菌蛋白的35%,并被TALON亲和柱芯有效纯化.经抑菌圈实验证明两种方法所获得的rLL-37多肽对G+、G-菌都具有较好的杀菌力.结论 rLL-37在原核细胞中的高效表达,为深入研究rLL-37的杀菌活性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘友生	第三军医大学西南医院病理学研究所	84	357	10.0	13.0
2	葛晓冬	第三军医大学西南医院病理学研究所	19	68	4.0	7.0
3	邹佳	第三军医大学西南医院病理学研究所	7	22	3.0	4.0
4	杨艳丽	第三军医大学西南医院病理学研究所	7	22	3.0	4.0