应用非变性聚丙烯凝胶电泳筛选siRNA质粒的实验研究

• 作者: 林一丹 王如文 蒋耀光 邓波
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNAi TGF-β1 非变性聚丙烯凝胶电泳
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-25
• 页数: 3页
• 分类号: R730.45
• 字数: 3475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2006.01.014

摘要

目的探讨利用非变性聚丙烯凝胶电泳筛选TGF-β1特异性siRNA表达质粒.方法以高表达TGF-β1人肺腺癌细胞株A549为肿瘤细胞模型,应用Angela原则选择siRNA序列,12%非变性聚丙烯凝胶电泳筛选siRNA表达质粒并经测序后转染A549细胞,间接免疫荧光和免疫印迹法检测转染前后A549细胞中TGF-β1表达水平.结果经典分子克隆方法成功构建pOligo 1210、pOligo 1216、pOligo 1363.12%非变性聚丙烯凝胶可以清晰地分辨出被双酶切的插入片段.转染A549细胞后均产生特异性的表达抑制效应,抑制率为50%～83.2%.结论采用非变性聚丙烯凝胶电泳成功筛选出TGF-β1为靶点的siRNA表达质粒,并可广泛应用于筛选siRNA质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王如文	第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心	148	793	12.0	19.0
2	蒋耀光	第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心	243	1835	20.0	31.0
3	邓波	第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心	50	191	7.0	11.0
4	林一丹	第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心	17	89	5.0	8.0