摘要:
目的:观察姬松茸复合多糖是否对环磷酰胺的抗肿瘤作用有增效效应,并分析其作用机制.方法:实验于2003-03/2004-04在齐齐哈尔医学院医药科学研究所完成.①选用健康成年昆明种小鼠135只,按随机数字表法分为9组:正常对照组,荷瘤对照组,环磷酰胺组,姬松茸复合多糖高、中、低剂量组,姬松茸复合多糖高、中、低剂量+环磷酰胺组,每组15只.②除正常对照组小鼠外,将0.2 mL浓度为1×1010 L-1S180肿瘤细胞接种于其余小鼠腋窝皮下.正常对照组和荷瘤对照组灌胃0.5mL生理盐水,1次/d,共10 d.环磷酰胺组先灌胃0.5 mL生理盐水,6 h后腔注射环磷酰胺10 mg/(kg·d);姬松茸复合多糖高剂量、中剂量、低剂量组分别按700,350,175 mg/(kg·d)灌胃姬松茸复合多糖[姬松茸多糖(50%)、香菇多糖(33%)、茯苓多糖(94%)均购自浙江庆元县金源真菌多糖有限公司.姬松茸多糖、香菇多糖、茯苓多糖以质量比4:2:1的比例混合,用前以蒸馏水稀释至所需浓度]1次/d,共10 d.姬松茸复合多糖高、中、低剂量+环磷酰胺组先分别灌胃350,175,88 mg/(kg·d)姬松茸复合多糖,6 h后各组小鼠腹腔注射环磷酰胺5 mg/kg;正常对照组和荷瘤对照组胃饲给予等体积蒸馏水.1次/d,共10 d.③用药4周后,计算抑瘤率[(1-实验组平均瘤重/荷瘤对照组平均瘤重)×100%].依q值评价联合用药增效情况.q=两药合用时的抑瘤率/[A药的抑瘤率+(1-A药的抑瘤率)B药的抑瘤率].q=0.85~1.25为两药作用相加,q>1.25为两药作用增强(或协同),q<0.85为两药拮抗.④应用电子显微镜观察肿瘤细胞形态变化,采用酶联免疫分析法检测血清白细胞介素2和P27蛋白表达变化.⑤组间比较采用t检验.结果:在实验过程中,荷瘤对照组造模失败1只,死亡3只,环磷酰胺组死亡3只,造模失败2只,姬松茸复合多糖高剂量组死亡2只,联合用药组死亡2只,造模失败1只.有121只进入结果分析.①抑瘤率:姬松茸复合多糖高、中、低剂量组和环磷酰胺组分别为10.6%,52.5%,30.2%,72.1%,姬松茸复合多糖高、中、低剂量+环磷酰胺组分别为65.8%,83.4%,82.7%,q值分别为0.876,0.962,1.027,均>0.85,表明不同剂量的复合多糖能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤的作用.②血清白细胞介素2水平:荷瘤对照组明显低于正常对照组(t=11.655,P<0.01),复合多糖中、低剂量组,姬松茸复合多糖中、低剂量+环磷酰胺组明显高于荷瘤对照组和环磷酰胺组(t=2.413~9.935,P<0.05~0.01).③P27蛋白表达:荷瘤对照组明显低于正常对照组(t=68.976,P<0.01),而各治疗组明显高于荷瘤对照组(t=3.188~2.684,P<0.01).姬松茸复合多糖中、低剂量和姬松茸复合多糖高、低剂量+环磷酰胺组明显高于环磷酰胺组(t=3.132~5.511,P<0.01).④透射电镜观察结果:单用姬松茸复合多糖各剂量组可见肿瘤细胞核固缩明显,凋亡细胞数量增多,部分细胞核崩解形成小体.姬松茸复合多糖各剂量+环磷酰胺组可见肿瘤细胞体积变小,细胞核固缩明显,细胞表面微绒毛消失,细胞内游离核蛋白体明显减少,胞质内线粒体空泡变性.结论:不同剂量的复合多糖均能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤作用,其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡,增强白细胞介素2、抑癌基因p27的表达有关.