麻疯树胚乳类F-盒蛋白基因的克隆和载体构建

• 作者: 吴迪 张淑文 张航 徐莺 朱疏影 王治涛 陈放 高帆
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 麻疯树 胚乳 F-box基序 亮氨酸重复单位
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 807-810
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|Q949.753.5
• 字数: 4619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687x.2007.06.012

摘要

通过随机测序从本实验室构建的麻疯树胚乳cDNA文库中获得了一条与多种植物、动物F-盒家族(F-box)序列相似的EST序列,并进一步克隆得到含有完整编码框的cDNA全长和基因组序列(Jc-Fbl1).Jc-Fbl1 cDNA全长1 672 bp,开放阅读框为1 224 bp,编码的蛋白质含有407个氨基酸残基.Jc-Fbl1推导的氨基酸序列与拟南芥、水稻中的同源F-box蛋白相似性分别为52%和75%;与人、斑马鱼、线虫等动物的F-box蛋白的相似性达到48%～56%.应用Pfam Search寻找功能结构域,发现其除了含有F-盒家族类结构域外,还有富含亮氨酸重复单位(leucine-rich repeats,LRRs).比对Jc-Fbl1的基因组序列和cDNA序列,发现Jc-Fbl1有两个长度分别为331 bp和893 bp的外显子和一个长362 bp的插入序列,符合内含子的GT-AG法则,认为是Jc-Fbl1的内含子.水稻、拟南芥基因组中的同源序列也出现了这种两个外显子、一个内含子的结构,且内含子位置较为保守.为了进一步研究麻疯树F-box蛋白的功能,构建了同时含有Jc-Fbl1完整开放阅读框序列和绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pBI121-Jc-Fbl1-GFP,并经酶切鉴定构建成功.图4参19