PEP-1肽介导人过氧化氢酶转导入人脐静脉内皮细胞

• 作者: 姚玲玲 孔霞 王家宁 郭凌郧 陈龙 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 过氧化氢酶 PEP-1肽 蛋白转导 脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12,封三
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2007.01.003

摘要

目的:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究PEP-1肽介导人过氧化氢酶穿透细胞的能力.方法:构建原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出N端带有6个组氨酸"标签"(His-tag)的重组蛋白,并通过金属螯合亲和层析对其进行纯化,然后将纯化得到的PEP-1-CAT融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过Western blot来分析其转导能力.结果:测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT重组成功.SDS-PAGE和Western blot结果表明,PEP-1-CAT在E.coli中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-CAT,并在体外检测到其具有特异的过氧化氢酶活性,活性值为77.1 U/g.将其加入到体外培养的内皮细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能保持酶活性达48 h.结论:PEP-1-CAT融合蛋白能高效地转导入人脐静脉内皮细胞,为防治各种与氧化应激损伤有关的疾病开辟了新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈龙	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	13	64	4.0	7.0
2	郭凌郧	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	26	189	9.0	12.0
3	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
4	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
5	姚玲玲	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	3	30	3.0	3.0