短发夹结构RNA对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1表达和超微结构的影响

• 作者: 凌光辉 刘伏友 彭佑铭 李军 段绍斌 陈星
• 来源期刊: 中国血液净化
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子-β1 RNA干扰 腹膜透析液 人腹膜间皮细胞
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 490-495
• 页数: 6页
• 分类号: R446.6
• 字数: 5764字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4091.2007.09.009

摘要

目的 研究靶向转化生长因子-β1(TGF-β1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表达TGF-β1的影响,并观察其对HPMC超微结构的影响. 方法 利用pcDU6质粒构建两个靶向TGF-β1的shRNA真核表达载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,使用脂质体介导转染腹膜透析液刺激下的HPMC,采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)检测shRNA表达载体对于TGF-β1基因和蛋白质表达水平的抑制效果,使用透射电镜观察HPMC超微结构的改变. 结果 HPMC暴露于4.25%腹膜透析液中48小时后,其上清中TGF-β1的浓度与对照组相比显著增高分别为(39.71±6.60)pg/105 cells和(16.32±2.71)pg/105 cells,P＜0.01),1.5%腹膜透析液对于TGF-β1蛋白合成无明显影响;而预先转染了shRNA载体的两组与转染pcDU6载体(空载体)的组相比,其由4.25%腹膜透析液诱导的TGF-β1蛋白增高幅度明显减少,分别下降了39.2%和47.2%(P＜0.01);两组转染不同的shRNA载体的HPMC之间相比TGF-β1浓度无显著差异,pcDU6载体(空载体)转染组与4.25%腹膜透析液刺激组TGF-β1浓度亦无显著差异.透射电镜显示HPMC暴露于4.25%腹膜透析液可导致细胞扁平、微绒毛减少和线粒体水肿等,而转染shRNA载体组细胞的改变相对较轻. 结论 pcDU6质粒载体介导的短发夹结构RNA(shRNA)能够明显抑制腹膜透析液刺激下的人腹膜间皮细胞TGF-β1的高表达,并减轻其超微结构的异常,提示shRNA表达载体可能有益于腹膜纤维化的防治.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李军	中南大学湘雅二医院肾内科	169	978	16.0	24.0
2	凌光辉	中南大学湘雅二医院肾内科	47	180	8.0	11.0
3	刘伏友	中南大学湘雅二医院肾内科	193	1123	16.0	21.0
4	彭佑铭	中南大学湘雅二医院肾内科	189	982	15.0	20.0
5	段绍斌	中南大学湘雅二医院肾内科	65	451	11.0	17.0
6	陈星	中南大学湘雅二医院肾内科	51	257	9.0	13.0