针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较

• 作者: 刘家云 孟艳玲 杨安钢 温伟红 王凯 王成济 薛茜 薛采芳 贾林涛 赵晶
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 RNA干扰 shRNA表达框 siRNA
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 353-357
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2007.04.017

摘要

目的 化学合成针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA,同时制备针对相同区段的shRNA表达框,并比较二者对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用.方法 化学合成针对HBV S基因的带有FITC标记的siRNA,设计合成带有FITC标记的引物,PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框,并对扩增产物进行纯化,将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞,转染1 d后流式细胞仪检测转染效率,转染3 d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平,用SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达.收集转染前和转染后1、3、5和7 d的细胞培养上清,检测HBsAg水平,同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量.结果 成功制备了针对HBV S基因的shRNA表达框,将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2.2.15细胞后,RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低,SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制,细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降.与siRNA相比,shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢,但持续时间更长.结论 shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达,与siRNA相比,shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达.