质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用

• 作者: 丁涵露 何娅妮 吴劲松 张建国 李开龙 李新伦 杨聚荣 林静 梁海君
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: cubilin RNA干扰 siRNA 人近端肾小管上皮细胞
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 471-474
• 页数: 4页
• 分类号: R322.61|R394-33|R394.2
• 字数: 3858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.06.002

摘要

目的 观察cubilin siRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用.方法 针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC 24 h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化.结果 FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性.与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少.结论 成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取.