检测戊型肝炎病毒核酸的实时荧光聚合酶链反应法的建立

• 作者: 张峰 张春涛 李卓 王佑春 赵晨燕 阎宝山
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 核糖核酸 实时荧光逆转录聚合酶链反应 优化
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 932-936
• 页数: 5页
• 分类号: R512.6
• 字数: 3864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.12.018

摘要

目的 建立一种能快速、敏感地检测戊型肝炎病毒(HEV)核酸的实时荧光聚合酶链反应法(Real-time RT-PCR).方法 基于HEV ORF3保守区序列,设计引物和探针,从22对引物和4条探针中进行筛选,并对选出的引物和探针的浓度、反应体系、反应条件、核酸抽提方法等进行优化.采用常规套式RT-PCR和本研究建立的实时荧光RT-PCR检测不同样品,比较两种方法的特异性和敏感性.结果 优化出1对引物和探针的组合.优化的30μl反应体系中,上、下游引物浓度均为0.10mmol/L,探针浓度为0.20 mmol/L,Taq酶的浓度为3U,AMV逆转录酶浓度为2U.优化的反应条件为:50% 30min;95℃3min;95℃10s,50℃ 30s,72℃60s,5个循环;95℃ 10s,57℃40s,40个循环.初步检测结果显示,该方法与常规套式RT-PCR特异性符合率为100%,两种方法检测HEV1型样品的敏感性均为104,检测人和猪的HEV4型样品时,实时荧光RT-PCR敏感性均为104,明显高于常规套式RT-PCR的103和102.结论 所建立的检测HEV核酸的实时荧光聚合酶链反应法具有简便、快速、敏感性较高以及不易被污染等优点,具有一定的临床应用潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王佑春	中国药品生物制品检定所细胞室	92	755	12.0	23.0
2	张春涛	中国药品生物制品检定所细胞室	27	90	5.0	7.0
3	赵晨燕	中国药品生物制品检定所细胞室	18	67	5.0	6.0
4	李卓	北京市佑安医院肝炎研究所	3	62	2.0	3.0
5	阎宝山	北京金豪生物医药公司研发部	3	12	2.0	3.0
6	张峰	中国药品生物制品检定所细胞室	2	10	2.0	2.0