幽门螺杆菌UreB抗原表位预测及其有效表位噬菌体展示的筛选

• 作者: 严杰 毛亚飞 王学海
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位基因 原核表达 抗原表位预测 噬菌体展示 B细胞表位 T细胞表位
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 432-437
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4257字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2007.05.011

摘要

目的 筛选幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)分子中的抗原表位,为研制多抗原肽(MAP)疫苗奠定基础.方法 采用生物信息学技术对UreB的T细胞和B细胞表位进行预测和分析.构建ureB基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rUreB,常规皮内免疫法制备兔抗血清.选择UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽并构建其噬菌体展示系统,PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体,SDS-PAGE鉴定目的重组PⅢ蛋白(rPⅢ).分别以商品化抗Hp全菌IgG和rUreB抗血清为一抗,采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选.结果 与GenBank中相关序列比较,所克隆的ureB基因核苷酸和氨基酸相似性分别为96%～99.5%和96%～100%.rUreB表达量约为细菌总蛋白的52%,提纯后仅见单一蛋白条带.预测的4个主要表位肽UreB230、UreB322、UreB479和UreB527在M13噬菌体中获得成功表达,采用不同一抗的Western blot均显示相似的阳性结果,但UreB322和UreB527反应强度明显高于UreB230和UreB479.结论 本研究成功地构建ureB基因高效原核表达系统和UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统.所采用的生物信息学技术可有效地预测抗原表位.UreB322和UreB527是UreB有效抗原表位,可作为幽门螺杆菌MAP疫苗的候选表位.