HLA-DRα和HLA-DRB1*0405 表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

• 作者: 向志光 张连峰 栗占国 赵义 陈振军
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HLA-DR 真核表达 关节炎,类风湿
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 311-316,封三
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 4808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2007.06.001

摘要

目的 构建HLA-DRα和HLA-DRB1*0405真核表达载体,并使其在哺乳动物细胞内得到表达.方法 从含HLA-DRα全长cDNA的质粒中扩增HLA-DRα的ORF序列,通过酶切将载体pIRES2-EGFP中的EGFP切除,将HLA-DRα ORF插入到载体中;采用RT-PCR方法 从HLA-DRB1*0405阳性人外周血单个核细胞中克隆出HLA-DRB1*0405 ORF序列,将其插入pIRES2-DRα载体的多克隆位点处,构建出真核表达载体pIRES2-DRαβ1*0405.对构建的载体进行限制性内切酶鉴定和测序.采用脂质体转染方法 将表达载体转入小鼠成纤维细胞系DAP2.3中,通过流式细胞术和间接免疫荧光法对HLA-DRα和HLA-DRB1*0405的表达进行检测.结果 酶切鉴定和测序证实目的 基因插入正确且序列与GenBank一致.流式细胞术检测约41.41%的转pIRES2-HLA-DRαβ1*0405载体的细胞呈阳性,间接免疫荧光显示HLA-DRα和HLA-DRB1*0405在转基因细胞中得到表达并形成完整的HLA-DR4分子,表达于胞膜及胞质内.结论 成功构建出真核表达载体pIRES2-DRαβ1*0405,并在小鼠成纤维细胞系中得到表达,为下一步进行稳定细胞系的建立和转基因鼠模型的构建奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张连峰	中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所遗传中心	67	463	12.0	18.0
2	栗占国	北京大学人民医院风湿免疫科	286	2897	24.0	41.0
3	赵义	北京大学人民医院风湿免疫科	11	80	5.0	8.0
4	向志光	中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所遗传中心	25	50	4.0	5.0