人类白细胞抗原DR4(*0405)表达细胞系的建立

• 作者: 向志光 张连峰 栗占国 赵义 陈振军
• 来源期刊: 中华临床免疫和变态反应杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类白细胞抗原 真核表达 类风湿关节炎
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 8-13,130
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8705.2007.01.008

摘要

目的 构建人类白细胞抗原(HLA)DR4(*0405)真核表达载体,并使其在小鼠成纤维细胞系中得到稳定表达.方法 从含HLA-DRA全长cDNA的质粒中扩增HLA-DRA的开放读码框(ORF)序列,通过酶切将载体pIRES2-EGFP中的增强绿色荧光蛋白(EGFP)切除,将HLA-DRA ORF插入到载体中;采用RT-PCR方法从HLA-DR4(*0405)阳性人外周血单个核细胞中克隆出HLA-DRB1*0405 ORF序列,将其插入pIRES2-DRα载体的多克隆位点处,构建出真核表达载体pIRES2-DRαβ1*0405.对构建的载体进行限制性内切酶鉴定和测序.采用脂质体转染方法将表达载体转入小鼠成纤维细胞系DAP2.3中,G418抗性筛选,并进行单克隆扩增.通过流式细胞术对细胞克隆进行鉴定,筛选出高表达HLA-DR4(*0405)的细胞株,并采用激光共聚焦显微镜观察HLA-DR4(*0405)在小鼠成纤维细胞中的表达情况.结果 酶切鉴定和测序证实目的 基因插入正确且序列与Genbank一致.流式细胞术筛选得到了高表达HLA-DR4(*0405)的稳定转染细胞株,阳性率达到74.65%.激光共聚焦显微镜观察证实HLA-DR4(*0405)分子在小鼠成纤维细胞系得到了表达,主要分布于胞膜及胞质内.结论 成功构建出真核表达载体pIRES2-DRαβ1*0405,并在小鼠成纤维细胞系中获得稳定表达,为进一步开展HLA-DRB1*0405的功能研究和转基因鼠模型的建立奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张连峰	中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心	67	463	12.0	18.0
2	栗占国	北京大学人民医院风湿免疫科	286	2897	24.0	41.0
3	赵义	北京大学人民医院风湿免疫科	11	80	5.0	8.0
4	向志光	中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心	25	50	4.0	5.0
5	陈振军	澳大利亚墨尔本大学微生物及免疫学系	1	0	0.0	0.0