动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立

• 作者: 常小斌 李健 潘淑娟 王巧全 王权 陈志强 陈永军
• 来源期刊: 中国兽医寄生虫病
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫 新孢子虫 套式PCR 食品检测
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 5693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2007.06.001

摘要

目的 为了建立一种快速、特异、灵敏检测动物源性食品中弓形虫的技术.方法 根据原虫rDNA的部分序列,找出弓形虫和新孢子虫共同保守DNA片段,设计套式PCR两对引物,以UltraPureTM基因组DNA快速提取试剂盒提取弓形虫和新孢子虫DNA为模板,初步建立了检测两种虫体的Nested PCR技术.将纯化的Nested PCR产物成功地克隆到pGEM-T-easy载体中,经鉴定、测序并进行同源性分析.结果 Nested-PCR的外、内引物对两种虫体rDNA基因均能进行扩增,长度分别在800～900 bp、400～500 bp之间.内引物扩增DNA序列与公布的同种虫体DNA序列同源性较高,弓形虫和新孢子虫分别达99.1%、97.2%,但它们两者之间差异较大,同源性仅为86.6%.用软件寻找能区别两者基因序列差异的酶切位点,挑选内切酶进行RFLP实验,结果表明新孢子虫Nested PCR扩增片段能被Vsp1酶切.同时进行该分子检测技术的特异性和敏感性试验,实验证明该Nested PCR能对弓形虫和新孢子虫rDNA基因进行特异性的扩增,而对其它原虫基因未能扩增出任何片段;该Nested-PCR能检测出100个弓形虫速殖子/g猪肉.结论 本实验建立Nested PCR检测方法不仅可用于检测动物性食品中弓形虫,而且能明确区分弓形虫和新孢子虫.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王权	中国农业科学院上海兽医研究所	65	346	11.0	15.0
2	李健		50	270	9.0	12.0
3	王巧全		33	179	8.0	11.0
4	陈永军	中国农业科学院上海兽医研究所	27	211	10.0	14.0
5	陈志强		5	19	2.0	4.0
6	常小斌		6	99	5.0	6.0
7	潘淑娟		2	10	1.0	2.0