多枝赖草基因组Mb级DNA制备和酶切方法的优化

• 作者: 周玉雷 张艳 徐粤宇 王克武 王志平 赵茂林
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多枝赖草 Mb级DNA 基因组文库 脉冲交变电场电泳 酶切
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: Q781|Q243|S812.8
• 字数: 5117字
• 语种: 中文

摘要

Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础.以浓度0.4%(m/m)NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核,经钢丝细胞筛过滤,多次回收滤渣和离心上清中的细胞核,相差显微镜调浓度达108个/mL后,经LMP包埋,蛋白酶K降解核蛋白,脉冲电泳纯化回收后,在LMP胶块中2 Mb以上DNA的浓度约为250 ng/μL.在胶中经Hind III部分酶切再用脉冲电泳回收不同大小范围的DNA,电洗脱浓缩除盐后浓度约为25 ng/μL.用此方法得到的核DNA不但无细胞器DNA等的污染,而且浓度高,可直接用于各种人工染色体文库的构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张艳		19	174	9.0	13.0
2	赵茂林		27	353	12.0	18.0
3	周玉雷		7	59	4.0	7.0
4	徐粤宇		2	9	2.0	2.0
5	王志平		6	29	3.0	5.0
6	王克武		9	55	5.0	7.0