黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究

• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 黄瓜 DNA提取 AFLP反应体系
• 年，卷（期）: 2009,（29）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 14035-14037
• 页数: 3页
• 分类号: S642.2
• 字数: 3369字
• 语种: 中文

摘要

[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化.[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱.[结果]DNA 模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB 提取法可用于黄瓜AFLP 分析,形成清晰的AFLP 指纹.优化的酶切连接体系为:以37 ℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200 ng,预扩增时Taq酶用量为0.5 U/20 μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板.在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带.[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础.