白细胞介素-10腺病毒载体制备及其在血管平滑肌细胞的表达

• 作者: 刘康达 刘弋 汪圣毅 王玉琦 符伟国
• 来源期刊: 中国普外基础与临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 白细胞介素 血管内膜增生
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础与实验研究
• 页码范围: 660-664
• 页数: 5页
• 分类号: R654.3|R456
• 字数: 5171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9424.2007.06.012

摘要

目的 构建人白细胞介素(human interleukin,hIL)-10和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)双表达腺病毒载体,观察目的 基因在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的表达.方法 以T载体(pUCm-T/hIL-10 cDNA)为模板,PCR扩增hIL-10 cDNA,连入穿梭质粒,卡那霉素抗性筛选,NotⅠ、XholⅠ酶切鉴定,测序,局部序列搜索工具(BLAST)分析序列正确,Pme Ⅰ酶切,电穿孔单独转化BJ5183-AD-1,转化XL10-Gold扩增,PacⅠ酶切,AD-293细胞包装,PCR鉴定,测定病毒滴度,脂质体介导转染VSMCs,荧光显微镜下观察GFP的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中hIL-10的含量.结果 重组穿梭质粒构建正确,同源重组后PacⅠ酶切获得30 kb和3 kb片段,重组病毒滴度为3×1010 efu/ml,PCR检测含目的 基因,转染的VSMCs可见绿色荧光,hIL-10含量为25 ng/106个细胞.结论 构建的双表达载体于VSMCs成功表达,为血管内膜增生的基因治疗打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	符伟国	复旦大学中山医院血管外科	278	1148	15.0	21.0
2	汪圣毅	安徽医科大学第一附属医院普外科	41	124	6.0	8.0
3	刘康达	复旦大学中山医院实验中心	26	86	6.0	7.0
4	王玉琦	复旦大学中山医院血管外科	133	817	14.0	23.0
5	刘弋	安徽医科大学第一附属医院普外科	128	562	10.0	15.0