突变型P53的pSUPER-EGFP1 RNAi系统的构建

• 作者: 张钧 王丽 谢鑫友
• 来源期刊: 浙江医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 siRNA p53
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 1026-1028
• 页数: 3页
• 分类号: R4
• 字数: 3275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2785.2007.10.006

摘要

目的 构建抑制突变型p53基因siRNA表达载体.方法 化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向突变型p53基因的寡核苷酸(各58个碱基),退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切后的pSUPER-EGFP1(pSG)载体的polⅢH1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立非特异对照.构建好的干扰载体瞬时转染胃癌细胞SGC-7901,用RT-PCR检测其对突变型p53基因的抑制效果.结果 重组构建的pSUPER-EGFPl-p53(pSG-p53i)载体经双酶切电泳分析及插入基因序列分析,58个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.RT-PCR显示pSG-p53i对突变型p53基因的表达具有较好的瞬时抑制作用.结论 载体的成功构建,有助于深入研究其对突变型p53基因的稳定抑制作用.体内合成siRNA的方法,可将RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张钧	浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科	45	164	7.0	10.0
2	谢鑫友	浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科	48	207	8.0	11.0
3	王丽		1	1	1.0	1.0