小鼠β-防御素2肿瘤疫苗的构建及特性鉴定

• 作者: 吴克复 徐玢 林永敏 石洋 董成亚 马小彤
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 防御素 天然免疫 瘤苗 急性淋巴细胞白血病
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 675-679
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4793字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建分泌性小鼠β-防御素2(MBD2)真核表达质粒,转染L1210淋巴细胞白血病细胞,对转染细胞进行功能及特性鉴定.方法:RT-PCR法从小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片段,用overlap PCR法将小鼠Igκ信号肽与MBD2成熟片段相连,构建MBD2分泌表达载体.经测序证实序列正确后,脂质体法转染L1210细胞,筛选稳定表达细胞株.RT-PCR、Western blot检测瘤苗MBD2的表达.Transwell法检测瘤苗分泌的MBD2对不成熟树突状细胞(iDC)迁移的作用.细胞计数、PI染色及FACS观察转染MBD2对肿瘤细胞增殖、细胞周期及MHC Ⅰ类(H-2Kd, H-2Dd)、Ⅱ类(I-Ad)分子及共刺激分子(CD80、CD860)表达的影响.结果:转染MBD2基因的肿瘤细胞表达并分泌MBD2,并以剂量依赖方式趋化iDC,表明具有生物学活性.转染MBD2基因对肿瘤细胞生长增殖、细胞周期及细胞表面MHC分子及共刺激分子表达无明显影响.结论:本实验成功构建了MBD2白血病细胞疫苗,为进一步体内评价抗白血病效果奠定了基础.