禽流感HA基因密码子优化的DNA疫苗构建及其免疫原性的初步研究

• 作者: 卢山 张春华 张璐 李军 王世霞 黄祖瑚
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 疫苗,DNA 流感病毒,禽 血凝素,病毒 密码子
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 110-113
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3252字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2007.02.015

摘要

目的 构建H5 N1亚型禽流感病毒株密码子优化的血凝素(HA)DNA疫苗并研究其免疫原性.方法 应用MacVector软件分析H5N1亚型禽流感病毒A/Viet Nam1203/04株HA(H5-VN HA)基因序列,对这些序列进行密码子优化处理,人工合成优化后的H5-VN HA基因.将密码子优化H5-VN HA基因与pSW3891质粒连接,并以人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)信号肽取代H5-VNHA信号肽,构建成表达H5-VN HA基因的重组质粒,命名为HA-VN.tPA(即密码子优化的H5-VN HA基因DNA疫苗).以HA-VN.tPA转染293T细胞,应用蛋白质印迹法检测转染细胞中HA蛋白的表达.以HA-VN.tPA对2只新西兰兔进行DNA免疫,用ELISA方法检测分析免疫后兔血清中HA特异性抗体的产生.结果 密码子优化的H5-VN HA基因中哺乳动物细胞偏爱的密码子频率高于野生型H5-VN HA基因.蛋白质印迹法分析结果表明,HA-VN.tPA转染293T细胞后,细胞裂解液中检测出HA蛋白的表达.ELISA分析结果表明,以HA-VN.tPA免疫3次后,实验兔体内产生了较高水平的HA特异性抗体(血清中平台期抗体滴度达1:13 500).结论 成功构建了H5N1亚型禽流感病毒密码子优化的HA基因DNA疫苗,该疫苗可引导免疫后宿主体内产生高滴度特异性抗体.