甲型流感病毒H1N1HA 蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究

• 作者: 于虹 佟双 俞建萍 周育森 寇志华 杨裔 温晶 赵光宇 郭彦
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型H1N1流感病毒 昆虫S2 细胞 HA
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 875-879
• 分类号: R373.1
• 字数: 3576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.09.003

摘要

目的 在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1 HA并分析其免疫原性.方法 根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/ Bip/ V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA.酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro 共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平.结果 获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的 蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1 HA 抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体.结论 获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景.