PER1与RACK1蛋白作用位点分析

• 作者: 万朝敏 刘彦友 刘德松 汪宇辉 王正荣 甘露 胡丽娟 薛建新 鲁芳
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 近日节律 PERIOD1 蛋白相互作用 RACK1 酵母双杂交 WD40结构域
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 603-607
• 页数: 5页
• 分类号: R781
• 字数: 3618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.04.011

摘要

目的 筛选人下丘脑视交叉上核(SCN)区域内与PERIOD1(PER1)相互作用的新蛋白,研究RACK1与PER1的作用特点,明确其结合的关键结构域.方法 采用酵母双杂交方法,筛选得到人SCN区域内与PER1-PAS结构域相互作用的新蛋白,并构建5种表达不同长度RACK1片段的酵母文库质粒与PER1诱饵质粒共转染酵母AH109进行杂交,通过营养缺陷筛选、报告基因检测获得阳性克隆,并采用体外转录、免疫共沉淀实验证实阳性克隆蛋白间的相互作用.结果 酵母双杂交筛选得到人SCN区域内表达RACK1蛋白的克隆,重组RACK1表达质粒与PER-PAS诱饵质粒进行酵母双杂交筛选后得到三个阳性克隆:RACK1(WD1-7)、RACK1(WD4-7)和RACK1 (WD5-7),β-半乳糖苷酶测试阳性证实报告基因表达,免疫共沉淀结果显示阳性克隆与PER1蛋白间存在相互作用.结论 RACK1与PER1存在直接相互作用,RACK1含有7个WD40结构域,本研究发现与PER1结合的最小区域位于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ三个WD40结构域,提示其碳端序列为其结合的关键部位.