重组肝细胞生长因子质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

• 作者: 党洪胜 周宗科 彭文珍 李伟 杨静 沈彬 裴福兴 鲁芳
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 成骨细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 929-933
• 页数: 5页
• 分类号: R318|Q813.11
• 字数: 4407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.06.004

摘要

目的 构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础.方法 RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1(+)-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达.NPP法检测碱性磷酸酶合成情况.结果 成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGF mRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达.转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高.结论 成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李伟	四川大学华西医院骨科	239	1303	18.0	26.0
2	沈彬	四川大学华西医院骨科	255	2434	27.0	38.0
3	杨静	四川大学华西医院骨科	299	2512	29.0	38.0
4	周宗科	四川大学华西医院骨科	201	1898	22.0	35.0
5	裴福兴	四川大学华西医院骨科	488	4741	33.0	48.0
6	党洪胜	四川大学华西医院骨科	9	90	4.0	9.0
8	鲁芳	四川省人民医院医学科学院	7	10	2.0	2.0