白细胞介素12基因修饰大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞的建立

• 作者: 冼江 张宏斌 戴学军 林健 武婕 王伟民 王捷 詹纯列
• 来源期刊: 中国微侵袭神经外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 大鼠 白细胞介索12 质粒 神经胶质瘤 9L细胞
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 321-324
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3255字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-122X.2007.07.011

摘要

目的 构建大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒,建立rIL-12基因修饰并稳定表达的大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞.方法 用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35 cDNA,依次克隆人pcDNA3.1(-)/mycHis A质粒中,以IRES连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12.将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-pCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达.结果 所得rp40cDNA序列与Gene Bank NM022611及AF133197、rp35cDNA序列与Gene Bank NM053390及AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.质粒转染9L细胞后,获得2个rIL-12基因稳定、高效表达的9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量分别为139.0、162.1 pg/ml,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达呈阳性.结论 成功构建了rIL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12,并建立了9L/rIL-12细胞株,为rIL-12基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础.