人同种异体移植炎症因子-1的基因克隆及其在小鼠成纤维细胞中的表达

• 作者: 付康 刘收 柳欣 程首超 陆婕 陈孝平 陈正望
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 同种异体移植因子-1 NIH3T3细胞 转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 663-666
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3211字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2007.05.028

摘要

目的 构建人同种异体移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)基因的真核表达载体并在小鼠成纤维细胞系(NIH3T3)中表达,为进一步研究AIF-1蛋白的功能奠定基础.方法 利用基因重组技术,构建带有AIF-1基因的2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1.利用脂质体法将2种重组质粒分别转染NIH3T3细胞,用荧光倒置显微镜及Western blot方法观察及鉴定AIF-1在细胞中的稳定表达及瞬时表达.结果 酶切分析及DNA序列测定证实,AIF-1基因片段被分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)与pEGFP-C1.荧光显微镜观察到NIH3T3细胞中有绿色荧光分布.Western blot结果表明,转染重组质粒的NIH3T3细胞中,AIF-1表达量明显增高.结论 成功构建了2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1,经转染NIH3T3细胞株获得了AIF-1蛋白的瞬时表达及稳定表达.