肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响

• 作者: 任精华 何星星 姚津剑 徐冬 林菊生 陈琼
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾母细胞瘤过度表达基因 小干扰RNA 肝星状细胞 半定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2007,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1602-1608
• 页数: 7页
• 分类号: R73
• 字数: 6252字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.14.005

摘要

目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质(ECM)的影响.方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA-hH1neo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA(psiRNA1,2,3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒;与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降(73.0%vs 23.2%,51.4% vs 15.1%,均P＜0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平明显下降(59.8% vs 17.0%,37.1% vs 6.6%,P＜0.05),α-SMA蛋白表达水平下降.与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内HSC增殖活性显著降低(24 h:0.172±0.005 vs0.318±0.018,P＜0.05;48 h:0.296±0.004 vs0.472±0.029,P＜0.05;72 h:0.432±0.024 vs0.672±0.050,P＜0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV mRNA、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达及HSC增殖活性均无明显下降(均P＞0.05).结论:NOV可促进HSC增殖、活化及分泌细胞外基质,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林菊生	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	113	535	12.0	17.0
2	陈琼	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	28	205	8.0	13.0
3	姚津剑	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	10	26	2.0	4.0
4	徐冬	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	4	22	1.0	4.0
5	任精华	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	27	141	5.0	11.0
6	何星星	华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所	13	54	5.0	7.0