差速贴壁技术对大鼠脑皮质星形胶质细胞纯化率的影响

• 作者: 周欣 康颂建 明晓云 段耀奎 白波
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 差速贴壁技术 细胞培养 星形胶质细胞
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2829-2831
• 页数: 3页
• 分类号: R338.25
• 字数: 3905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.15.008

摘要

目的:观察差速贴壁技术对星形胶质细胞纯化率的影响,旨在建立一套可靠的大鼠脑皮质星形胶质细胞的取材分离、纯化培养技术.方法:实验于2006-06/08在泰山医学院生命科学研究所完成.实验材料:出生2～3 d的Wistar大鼠,雌雄不拘,由泰山医学院生命科学研究所实验动物中心提供.实验方法:选用出生二三天的Wistar大鼠进行脑皮质星形胶质细胞原代培养.实验分两组殚培养:常规培养组和差速贴壁培养组.差速贴壁培养组分别于15,30 min取出,轻轻翻转培养瓶,将上清液移至另一培养瓶中,放入培养箱中继续培养.7～10 d后传代,待细胞分层生长后,置于37 ℃摇床中250r/min振荡18 h,倒掉上清液,D-Hank's液洗3次后,加入0.25%胰酶消化,倒置显微镜下观察,待细胞突起回缩后加入含血清的培养基终止消化,用吸管反复吹打使细胞从瓶壁上脱落,细胞悬液1 000 r/min离心5 min后,弃上清液,加入含体积分数为0.2血清的DMEM培养基混悬沉淀,接种人预先涂有L-多聚赖氨酸的培养瓶中继续培养.采用双重免疫荧光法鉴定星形胶质细胞纯度,测定积分吸光度值判断星形胶质细胞的生长状况.结果:①应用差速贴壁技术培养星形胶质细胞可明显提高星形胶质细胞纯度[常规培养组:(82±3)%,差速贴壁培养组15 min:(94±2)%,差速贴壁培养组30 min:(95±2)%,P＜0.01].差速贴壁需要充分的时间,15 min组和30 min组在提高星形胶质细胞纯度方面无明显差别.②差速贴壁培养组星形胶质细胞积分吸光度值高于常规培养组(常规培养组:528±25,差速贴壁培养组15 min:972±17,差速贴壁培养组30 min:996±35,P＜0.05).结论:①差速贴壁技术可明显提高星形胶质细胞纯化度,并且星形胶质细胞生长状态明显优于常规培养方法.②最佳差速贴壁时间为15 min,过长差速贴壁时间对提高星形胶质细胞纯度无明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白波	泰山医学院生理学教研室	48	350	10.0	17.0
2	康颂建	泰山医学院生理学教研室	23	147	7.0	11.0
3	段耀奎	泰山医学院生理学教研室	15	63	4.0	7.0
4	周欣	泰山医学院生理学教研室	7	48	3.0	6.0
5	明晓云	泰山医学院生理学教研室	7	65	5.0	7.0