非神经源性细胞中tau蛋白的稳定表达及磷酸化

• 作者: 冯利杰 方辉 李琪 沈玉先 王海萍 粱燕
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: tau病变 tau蛋白质类 磷蛋白磷酸酶/拮抗剂和抑制剂 转染
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 119-123
• 页数: 5页
• 分类号: R745|R349.1|R341|R345.6
• 字数: 3356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2007.02.001

摘要

目的 建立稳定表达tau蛋白的稳转细胞系,并观察tau蛋白的过度磷酸化对稳转的非神经源性细胞形态和活性的影响.方法 构建pEGFP-C1-tau真核细胞表达质粒,建立稳转和表达融合蛋白GFP-tau的293T细胞系,并用不同浓度的蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸(OA)处理细胞以诱导其过度磷酸化,通过荧光显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法监测细胞的活性及免疫印迹法检测tau蛋白的表达及磷酸化水平.结果 成功地建立了稳定表达GFP-tau蛋白的非神经源性稳转细胞系,该细胞系在稳转后3～4周,细胞生长状态良好,细胞形态和突起生长基本正常.用OA处理后,细胞突起消失、变圆,贴壁性能差,死亡的细胞数量也增多,这些变化随着OA作用时间的延长或浓度的增加更加明显;MTT法显示细胞的增殖活性明显下降;免疫印迹法提示,100 nmol/L OA作用8 h后,磷酸化tau水平增加.结论 对于稳定表达tau蛋白的非神经源性细胞,OA可降低其增殖活性,该作用可能与OA抑制细胞内去磷酸化过程有关.