HLA-G基因siRNA真核表达质粒的构建及其对转染JEG-3细胞株HLA-G表达的抑制作用

• 作者: 侯开波 姚元庆 尹文 王晓蓉 陈建辉 雷迎峰
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HLA抗原 RNA,小分子干扰 转染 JEG-3细胞
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2295-2298
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4900字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2007.15.003

摘要

目的:构建针对人类白细胞抗原-G基因(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因siRNA表达质粒,观察其对转染JEG-3细胞的HLA-G基因表达的抑制作用.方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化pSuppressor-U6-neo连接、转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列.将重组真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株.应用RT-PCR、Western-blot方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平.结果:双酶切鉴定及测序图显示,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符.RT-PCR和Western-blot结果均表明瞬时转染重组pSuppressor-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达.结论:本试验成功构建了针对HLA-G基因的siRNAs表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,瞬时转染JEG-3细胞后可以明显抑制HLA-G基因的表达.