不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测

• 作者: 张丽霞 张寄南 杨迪 潘世扬 谢而付 陈丹 高丽 黄珮珺
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肺癌 血浆DNA 结肠多发性腺瘤样息肉(APC) 甲基化 实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 199-201
• 页数: 3页
• 分类号: Q503
• 字数: 2394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2007.03.015

摘要

目的 研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值.方法 用普通甲基化特异性基因扩增(methylation specific PCR,MSP)方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-Green Ⅰ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测.结果 NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200 μl血浆中能检测出102个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200 μl血浆中需投入103个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带.实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍.结论 实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断.