人角化上皮生长因子基因(hKGF)达载体对大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖的影响

• 作者: 张殿良 邓春 邱林 郭春宝
• 来源期刊: 重庆医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人角化上皮生长因子 基因克隆 多聚酶链式反应 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 817-821,850
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-3626.2007.08.010

摘要

目的:构建人角化上皮生长因子基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,为以后的hKGF基因功能和基因治疗研究提供实验材料.方法:提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增hKGF基因全长cDNA序列,经与pMD18-T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的hKGF基因cDNA全长序列插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建hKGF基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF.载体转染后大鼠肺泡Ⅱ型细胞进行免疫细胞化学及荧光显微镜鉴定,并进行细胞记数,绘制生长曲线.结果:经RT-PCR获得609bp含限制性内切酶位点的DNA片段,T载体克隆后经双酶切、测序,确定该片段为hKGF基因cDNA,进而构建hKGF真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,经双酶切,测序确证.转染载体后,有hKGF的阳性表达并随时间逐渐增加,大鼠肺泡Ⅱ型细胞也随时间出现明显分裂增殖.结论:成功构建hKGF基因真核表达载体pEGFP-C2-hKGF,为进一步应用于基因治疗研究提供工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱林	重庆医科大学儿童医院外科	60	367	11.0	17.0
2	邓春	重庆医科大学儿童医院外科	46	216	7.0	13.0
3	郭春宝	重庆医科大学儿童医院外科	54	145	6.0	8.0
4	张殿良	青岛大学附属医院肝胆外科	1	0	0.0	0.0