Bcl-2 siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定

• 作者: 尹心宝 林天歆 潘秋辉 胡明 许可慰 郭正辉 黄健
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱肿瘤 RNA干扰 基因,bcl-2
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 972-976
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.05.032

摘要

目的:构建bcl-2特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步观察其对膀胱癌细胞生长的影响.方法:根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与含U6启动子的pGenesil-1质粒定向连接,构建真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1 555.经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.转染T24细胞,采用半定量RT-PCR观察重组质粒对bcl-2mRNA表达的影响;用MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用.结果:构建了bcl-2 siRNA的真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1 555,并经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致.转染T24细胞72 h后,RT-PCR显示bcl-2基因表达下调接近80%;MTT发现T24细胞的体外生长受到明显抑制.结论:bcl-2的特异性siRNA真核细胞表达载体成功构建,有效沉默bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,抑制了癌细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭正辉	中山大学附属第二医院泌尿外科	42	258	10.0	13.0
2	黄健	中山大学附属第二医院泌尿外科	160	811	12.0	18.0
3	林天歆	中山大学附属第二医院泌尿外科	68	404	10.0	15.0
4	许可慰	中山大学附属第二医院泌尿外科	77	428	11.0	15.0
5	潘秋辉	中山大学附属第二医院医学研究中心	27	121	6.0	9.0
6	尹心宝	中山大学附属第二医院泌尿外科	21	112	6.0	9.0
7	胡明	中山大学附属第二医院泌尿外科	5	15	3.0	3.0