l-Caldesmon腺病毒的构建及其在ECV304细胞中的表达

• 作者: 向飞 宋华培 张家平 张琼 褚志刚 黄跃生
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 l-Caldesmon ECV304细胞
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1145-1147
• 页数: 3页
• 分类号: R322.123|R394-33|R394.2
• 字数: 2671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.12.005

摘要

目的 构建含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体.方法 以含有l-Caldesmon全长编码序列的pCGN-CaD为模板,PCR扩增l-Caldesmon, T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,得到含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.将收集的病毒液感染ECV304细胞,Western blot检测l-Caldesmon蛋白的表达.结果 成功构建了含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒载体,病毒滴度可达1×10 9U /ml.重组病毒感染后可使ECV304细胞l-Caldesmon表达较对照组增加5倍.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究l-Caldesmon蛋白在内皮细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.