靶向Pik3cb shRNA表达载体的构建及其对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

• 作者: 刘苏健 孙宗全 苏刚 邓勇志 陈家军 马丽
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 质粒 平滑肌
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 712-714
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3266字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1001-9030.2007.06.025

摘要

目的 构建大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,并检测其下调大鼠血管平滑肌细胞Pik3cb mRNA表达的效应.方法 根据Genbank中大鼠Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,酶切鉴定和测序无误后分别命名为pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2.通过脂质体转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞,确定转染效率;通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Pik3cb mRNA的表达;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2经测序和PCR扩增与原序列相同,转染大鼠平滑肌细胞48 h时转染率为15.7%,荧光定量PCR结果显示转染组Pik3cb mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),错配质粒组与对照组比较Pik3cb mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),TUNEL结果显示转染组凋亡细胞明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建重组真核表达质粒pU6-Pik3cb-shRNA,并有效下调大鼠胸主动脉平滑肌细胞Pik3cb mRNA的表达,为靶向Pik3cb防治移植血管再狭窄的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙宗全	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	180	676	11.0	15.0
2	陈家军	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	25	71	4.0	6.0
3	苏刚	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	16	67	5.0	7.0