应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

• 作者: 刘蓉 卢亦路 卢军 夏军 夏增亮 夏庆杰 张发强 李明远 王玲 闫乃红 陈清英
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 竞争性荧光定量聚合酶链反应 假阴性
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 1421-1424
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3319字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.12.019

摘要

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30 μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.