人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达

• 作者: 刘彦兵 刘桐林 李简
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Survivin-1基因 基因克隆 真核表达载体 肺腺癌A549
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 683-685
• 页数: 3页
• 分类号: R734.2|Q344.14
• 字数: 2438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.06.012

摘要

目的 克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin异构体之一Survivin-1(SVV-1)基因的编码序列,构建含SVV-1基因的真核细胞表达载体并在肺腺癌细胞系A549中高表达,为进一步研究该基因在肺腺癌发病中的作用奠定基础.方法 根据已发表的SVV-1基因的核苷酸序列自行设计一对分别含有BamHI和Xho l双酶切位点的survivin-1基因上下游引物,以A549细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用Bam HI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.0中,用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA3 0-SVV-1和DNA序列测定进行鉴定.用脂质体法将pcDNA3.0-SVV-1导入肺腺癌细胞系A549中,嘌呤霉素选择培养,经免疫组化法和western blot鉴定其表达.结果 RT-PCR扩增出长448 bp的特异性片段,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实,并测序表明序列与Gen-Bank报道完全一致.pcDNA3.0-SVV-1在A549细胞中有稳定表达.结论 成功克隆了SVV-1的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pcDNA3.0-SVV-1,有助于对SVV-1基因在腺癌发生中的致瘤机制做进一步研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李简	北京大学第一医院胸外科	109	727	11.0	22.0
2	刘桐林	北京大学第一医院胸外科	47	288	10.0	13.0
3	刘彦兵	北京大学第一医院胸外科	1	2	1.0	1.0