以8~10周龄的雄性黄羽鸡为对象,比较了原位两步胶原酶灌流法、改良的原位两步灌流法及原位一步灌流结合组织块消化法对成年鸡肝细胞的分离效果,同时比较了不同基础培养液对成年鸡肝细胞体外培养的影响.结果表明,采用改良的原位两步灌流法可以获得分离效果很好,均匀一致且活率达90%以上的肝细胞;以Williams' medium E为基础培养液,以1×105个/cm2密度接种,4h后肝细胞贴壁,随后在含ψ=7%新生牛血清的培养液中培养24h后,肝上皮细胞呈现典型的多角形,核圆透亮,聚集呈岛屿状生长,48h后增殖旺盛,96h后基本铺满培养皿底部,出现胆小管样结构,并可维持存活13d以上.本试验为进一步建立成年鸡肝细胞无血清培养体系,体外研究其功能奠定了基础.