草鱼肝细胞的分离与原代培养

• 作者: 冷向军 叶元土 宋亮 张宝彤 张波 王丽宏 秦洁 萧培珍 蔡春芳 许凡
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 草鱼 肝细胞 原代培养
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 33-39
• 分类号: Q95-33
• 字数: 8391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2012.03.008

摘要

目的 以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞为实验对象,在不同条件下进行原代培养,以探讨适合草鱼肝细胞生长的最佳条件及培养方法,用于饲料营养与非营养物质对草鱼肝细胞代谢、损伤作用机制的研究.方法 采用温胰蛋白酶消化法和红细胞裂解液分离、纯化肝细胞,MTT法测定细胞增殖率,并测定不同时期培养液上清液中LDH、Alb和BUN的含量,分析肝细胞生长状况.结果 采用0.25％浓度的温胰蛋白酶消化法,消化20min,分步收集肝细胞,经台盼蓝染色检测和血球计数板计数,活细胞数≥99％.结论 在含10％胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199培养基中,以接种浓度1.7×106cell/mL左右为宜,置于27℃、4.5％ CO2浓度的恒温培养箱中,可成功培养草鱼原代肝细胞.