斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立

• 作者: 宋凯 张冬玲 张春晓 王玲 霍振华 骆源
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 斜带石斑鱼 肝细胞 原代培养 细胞增殖率 肝细胞功能
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 558-565
• 分类号: Q813.1+1|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20150309796

摘要

本研究以斜带石斑鱼肝细胞为实验对象,在不同培养条件下进行原代培养,旨在探讨稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法.采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)的含量,以分析肝细胞生长状态.结果表明,组织块方法不适于斜带石斑鱼肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出,而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108个/g肝重,活细胞数达到95％;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199培养基;启动原代培养的48～72h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清液中LDH活性显著降低,ALB和BUN含量显著升高.结果显示,0.25％的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48～72h生长代谢旺盛.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玲	集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室	21	117	6.0	10.0
2	骆源	集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室	2	11	2.0	2.0
3	张春晓	集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室	22	115	6.0	10.0
4	霍振华	集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室	4	25	3.0	4.0
5	张冬玲	集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室	1	9	1.0	1.0