鲫鱼肝细胞分离与原代培养方法的优化

• 作者: 丁炜东 徐跑 曹丽萍 杜金梁 殷国俊 贾睿
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲫鱼 肝细胞 胰蛋白酶 原代培养
• 年，卷（期）: 2011,（z1）
• 页码范围: 206-212
• 分类号: S917
• 字数: 5851字
• 语种: 中文

摘要

通过不同的分离方法和培养条件探索鲫鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定的鲫鱼肝细胞原代培养模型.用台盼蓝染色检测细胞存活率；用WST-1检测细胞活力,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化.结果显示:组织块培养4～5 d后肝细胞从组织块中迁出并增殖,但这种方法所需时间长且细胞不易收集；机械分散法收集的细胞少,细胞存活率低；而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果.用0.1％胰蛋白酶消化30 min,每克肝重可收集1.47×108个细胞,平均存活率为91.43％.培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长.在含有10％(V/V)胎牛血清(FCS)M199培养基中,4％ CO2、28℃,肝细胞培养8～9 d后传代.