细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

• 作者: 侯秋莲 张壮志 张富春 张文宝 王慧
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 融合蛋白 抗血清
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 430-434
• 页数: 5页
• 分类号: R383.33
• 字数: 3874字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.05.010

摘要

目的 克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus, Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清.方法 从包囊中分离原头蚴, 抽提总RNA,采用RT-PCR的方法 扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清.Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价.结果 用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582 bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54 kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256 000.结论 成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张富春	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	286	2034	23.0	31.0
2	张壮志	新疆畜牧科学院兽医研究所	30	157	7.0	11.0
3	张文宝	新疆畜牧科学院兽医研究所	10	67	4.0	8.0
4	王慧	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	22	136	6.0	11.0
5	侯秋莲	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	4	32	3.0	4.0