细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析

• 作者: 付宝权 史大中 张德林 李文卉 李永光 李航 王艳华 苟惠天 贾万忠
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx) 基因表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 708-711
• 页数: 4页
• 分类号: R383.3
• 字数: 3000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.08.005

摘要

目的 在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性.方法 对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的 基因片段后连接到表达质粒载体pET30a, 构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α.筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法 和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性.结果 构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果 一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果 表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别.结论 成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性.