慢病毒介导的RNAi对卵巢癌细胞增殖及间皮素表达的影响

• 作者: 吴小华 李娜 王莉
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间皮素 RNA干扰 慢病毒 卵巢肿瘤 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 134-138
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31|R730.54
• 字数: 4579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.02.008

摘要

目的:构建间皮素(mesothelin,MSLN)RNAi重组慢病毒质粒,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞 MSLN的表达及细胞增殖的影响.方法:根据MSLN基因信息,设计了4个小干扰序列和1个阴性对照序列,利用慢病毒质粒载体pRNAT-U6 2/Lenti构建了5个重组质粒并进行了慢病毒包装,分别为LV-MSLN-negative、LV-MSLN-shRNA2、LV-MSLN-shRNA3、LV-MSLN-shRNA4;感染OVCAR-3细胞后,Western blotting和荧光免疫组化检测干扰效率,选择干扰效率高的质粒载体进行慢病毒大量包装;感染卵巢癌细胞OVCAR-3后,用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖的变化.结果:测序结果证明5种质粒载体的插入序列完全正确,鉴定证明慢病毒包装成功.慢病毒感染OVCAR-3细胞后,Western blotting证实重组慢病毒LV-MSLN-shRNA4的干扰效率最高,对MSLN蛋白表达的抑制达90%.荧光免疫组化的共聚焦照片显示干扰组(OVC-shRNA)定位于细胞膜的MSLN蛋白表达明显弱于阴性对照组(OVC-neg)和空白对照组(OVC).OVC-shRNA组细胞增殖[(11.2±1.3)×105]显著慢于OVC-neg组[(20.5±2.5)×105]和OVC组[(21.9±2.3)×105] (P＜0.05).OVC-shRNA组克隆形成率为(15.2±2.1)%,明显低于OVC-neg组[(27.9±2.5)%]和OVC组[(28.8±3.1)%](P＜0.05).结论:成功构建MSLN RNAi重组慢病毒质粒LV-MSLN-shRNA4,它能有效抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的MSLN表达及细胞增殖,为进一步研究MSLN应用于肿瘤基因治疗奠定了基础.