苏云金芽胞杆菌WB9菌株cry2Ac4基因的克隆及表达

• 作者: 关雄 庄浩瀚 李今煜 潘洁茹 陈志 黄天培 黄张敏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 cry2Ac基因 克隆 表达 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 341-345
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.02.029

摘要

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)WB9是我国分离自武夷山的对多种重要农业害虫具有高毒力的菌株,经PCR-RFLP鉴定含有cry2Ac基因.根据cry2基因序列设计引物,以WB9质粒为模板扩增cry2Ac全长基因,与大肠杆菌(Es-chetichia cob)克隆载体pMD18-T连接获得含有cry2Ac全长基因的重组质粒pMD2Ac并测序.该基因在GenBank登录号为DQ361267.被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ac4.通过亚克隆方法将cry2Ac4基因插入穿梭表达载体pHT315获得重组表达质粒pHT2Ac,将其转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73 Cry,得到的工程菌能正常表达70 kD蛋白,形成方形晶体.生物测定结果表明,cry2Ae4基因表达产物对桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel)幼虫具有显著的毒杀作用,但对小菜蛾(Plutella xylostella)和致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)幼虫基本没有效果.