转录反式激活蛋白转导域介导HBcAg穿透细胞膜的作用

• 作者: 余永胜 张韡 汤正好 潘庆春 臧国庆 韩进超
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反式激活因子类 转导 遗传 肝炎核心抗原 乙型 细胞膜
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 336-340
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4270字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-6680.2008.06.004

摘要

目的 观察蛋白转导域(PTD)-HBcAg融合蛋白的细胞膜穿透作用.方法 合成转录反式激活蛋白(Tat)-PTD编码序列,PCR技术扩增HBcAg全长基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法将Tat-PTD编码序列和HBcAg全长基因融合,将融合基因克隆到pMAL-c2X原核表达载体中.挑选测序正确的构建质粒,转化大肠埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,Western印迹鉴定,亲和层析纯化融合蛋白PTD-HBcAg,同样方法得到HBcAg蛋白作为对照.纯化蛋白加入细胞培养介质中,间接免疫荧光检测进入细胞内的PTD-HBcAg和HBcAg.结果 大肠埃希菌中过度表达的融合蛋白可通过亲和层析纯化,Western印迹证实纯化的PTD- HBcAg和HBcAg能被HBeAg单克隆抗体识别,细胞免疫荧光检测证实PTD-HBcAg可跨膜转导入细胞内,而单独的HBcAg未能在细胞内检测到.结论 融合蛋白PTD-HBcAg可在原核表达系统中高效表达、分离纯化,PTD能介导HBcAg穿透细胞膜进入细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤正好	上海交通大学附属第六人民医院感染科	85	349	10.0	14.0
2	潘庆春	上海交通大学附属第六人民医院感染科	17	53	5.0	6.0
3	臧国庆	上海交通大学附属第六人民医院感染科	119	570	13.0	18.0
4	余永胜	上海交通大学附属第六人民医院感染科	86	301	9.0	12.0
5	张韡	上海交通大学附属第六人民医院感染科	3	9	1.0	3.0
6	韩进超	上海交通大学附属第六人民医院感染科	4	39	2.0	4.0